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恒溫消解在蛋白質(zhì)測(cè)定中的應(yīng)用

 

蘇敬武   叢偉紅   車(chē)燕妮

（威海市衛(wèi)生防疫站  威海  264200）

本文摘自《中國(guó)食品衛(wèi)生雜志》2001年第13卷第4期

 

    凱氏定氮法測(cè)定蛋白質(zhì)的含量，是zui常用的蛋白質(zhì)測(cè)定方法，但樣品的消解費(fèi)事費(fèi)時(shí)，一般一臺(tái)電爐一天zui多消化兩個(gè)樣品。我們采用型恒溫消解儀進(jìn)行蛋白質(zhì)消解，4~6小時(shí)可同時(shí)消化16個(gè)樣品。

1  實(shí)驗(yàn)方法

1.1  儀器及試劑

1.1.1  儀器

    DTD-40型恒溫消解儀（北京中衛(wèi)食品衛(wèi)生科技公司出品）；平底硬質(zhì)玻璃消化管；定氮蒸餾裝置。

1.1.2  試劑

    硫酸銅；硫酸鉀；硫酸；過(guò)氧化氫；20g/L硼砂溶液；混合指示劑：2份1g/L甲基紅乙醇溶液與5份2g/L溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合；400g/LNaOH溶液；C（HCl）=0.02000mol/L的鹽酸標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液。

1.2  實(shí)驗(yàn)操作

1.2.1  樣品消解

    稱(chēng)0.2-2.0g固體樣品或5-10g液體樣品于平底玻璃消化管中，加0.2g硫酸銅，3g硫酸鉀及20ml硫酸，稍搖勻后于管口放一小漏斗，置于恒溫消解儀中，300℃左右，小心加熱，一般2h內(nèi)，管內(nèi)容物可全部炭化，泡沫*停止。將溫度降至240℃左右，分幾次向管內(nèi)共加10ml過(guò)氧化氫，提高溫度至390℃左右，繼續(xù)消化，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱30min，放冷后，定容100ml，混勻備用。取與處理樣品相同的硫酸銅、硫酸鉀、硫酸、過(guò)氧化氫按同一方法做試劑空白實(shí)驗(yàn)。

    本方法全部消化過(guò)程約需4-6h，一次zui多可消化16個(gè)樣品。

同時(shí)使用普通電爐進(jìn)行蛋白質(zhì)消解，進(jìn)行比較實(shí)驗(yàn)。

1.2.2  定氮測(cè)定

    按國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)^[1]中GB 5009.5-85食品中蛋白質(zhì)的測(cè)定方法（4.3）微量定氮法進(jìn)行操作。

2 結(jié)果及討論

2.1 樣品的用量：根據(jù)不同的蛋白質(zhì)含量，取0.2g-2.0g樣品，置消化管內(nèi)進(jìn)行消解，在300℃初始消解無(wú)外溢現(xiàn)象。樣品先加酸放置過(guò)夜，可加快消解速度。開(kāi)始消解時(shí)，由于消解溫度恒定，消解管整體受熱均勻，一般泡沫不能溢出管外，較直接電爐消解容易控制。

2.2 消解溫度：初始消解時(shí)溫度不可過(guò)低，過(guò)低造成消化時(shí)間延長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)證明初始消解溫度300℃為宜。只要消解管內(nèi)無(wú)泡沫產(chǎn)生，應(yīng)及時(shí)把溫度提高到390℃左右，以加快消解速度。

2.3 不同消解方法蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果的比較：對(duì)保健品、乳及乳制品等15份樣品，用凱氏燒瓶和恒溫消解儀消化樣品，分別測(cè)定蛋白質(zhì)含量，結(jié)果比較如下：

表1  兩種消解方法蛋白質(zhì)測(cè)定結(jié)果比較（%）

樣品號(hào)	普通電爐消解法	恒溫消解儀法
1	16.3	17.0
2	30.8	33.8
3	23.0	22.2
4	3.25	3.33
5	3.38	3.59
6	1.44	1.27
7	0.510	0.555
8	0.490	0.477
9	0.842	0.891
10	2.95	3.01
11	0.576	0.627
12	0.574	0.579
13	0.572	0.630
14	0.319	0.327
15	0.319	0.337

    T=1.033; T_[14,0.05）=2.145，P>0.05

    兩種方法消化樣品，蛋白質(zhì)含量測(cè)得結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理表明無(wú)顯著差異。

參     考     文     獻(xiàn)

1  GB/T 5009-1996  食品衛(wèi)生檢驗(yàn)方法（理化部分）